Controlo de Qualidade
Transglutaminase
Definição
Transglutaminase inclui enzimas que catalisam a reação de transferência de acila em que o grupo Y-carboxamida de resíduos de glutamina em proteínas e peptídeos atua como doador de acila, e o grupo amina primária em compostos aminas ou o grupo ξ-amino de resíduos de lisina em proteínas ou peptídeos atua como receptor de acila. É derivado do fígado de animais ou da cultura de actinomicetos (limitado a solução treptoverticillium mobaraense e espécies do gênero solução treptomyces ) ou bactérias (limitado a espécies do gênero Bacillus ). Pode conter alimentos utilizados exclusivamente para volume, pós, diluição, estabilização, conservação ou ajuste de sua atividade. Pode igualmente conter aditivos alimentares utilizados para o volume, a pulverização, a diluição, a estabilização ou a conservação ou para o ajuste do seu pH ou actividade.
Descrição
Transglutaminase ocorre como grânulos, pó ou pasta brancos a castanhos escuros, ou como um líquido incolor a castanho escuro. É inodoro ou tem um odor característico.
Identificação
A Transglutaminase está em conformidade com o Teste de Atividade da Transglutaminase .
Pureza
(1) C humbo Não superior a 5 μg/g como Pb (0,80g, método 1, solução de controle: solução padrão de chumbo 4,0mL, método da chama).
solução e o resíduo não se dissolver em 5 ml de ácido nítrico diluído (1 em 100) na preparação da solução de ensaio, realizar o ensaio utilizando o método 3.
(2) Arsénico Não superior a 3 μg/g como As (0,50g, método 5, cor padrão: solução padrão de arsênio 3,0mL, aparelho B).
Limites microbianos
Proceda conforme indicado sob os Testes Limites Microbiais.
C ontagem total de placas: Não mais de 50.000 por grama.
Escherichia coli : Negativo por teste.
solução almonella : Negativo por teste.
Fluido de Amostra Preparar conforme indicado no método 3 para a contagem total de placas.
Pré-enriquecimento C C ultura Preparar como indicado no método 3 para o teste Escherichia coli e o método 2 para o teste solução almonella .
Teste de Atividade da Transglutaminase
Executar o teste usando o método abaixo indicado. solução e o ensaio de identificação não puder ser realizado pelo método indicado, a substituição adequada do factor de diluição da amostra, da solução tampão e da temperatura para a reacção é aceitável se tal for cientificamente justificado. solução olução de amostra
Pese 0,10g de Transglutaminase, adicione tampão Tris (0,2mol/L) em pH6. solução e necessário, prepare uma diluição de 10 ou 100 vezes adicionando o mesmo tampão (0,2mol/L, pH6,0) à solução resultante. solução olução de substrato
Pese 4,048g de benziloxicarbonil-L-glutaminilglicina, 2,780g de cloreto de hidroxilamônio, 1,229g de glutationa (forma reduzida), 0,295g de desidratado de cloreto de cálcio e 9,688g de 2-amino-2-hidroxi metil-1,3-propanodionl, e dissolva-os em água, depois ajuste o pH desta solução para 6,0, e faça 400mL. solução olução de ensaio
Equilibre 0,2mL da solução da amostra a 37℃ por 1 minuto, adicione 2 ml da solução do substrato, equilibrado a 37℃ por 10 minutos, e agite bem imediatamente. Incubar a mistura a 37℃ por 10 minutos. Adicione 2 ml de cloreto de ferro (III) (para o teste de atividade da transglutaminase) e agite bem imediatamente. C entrifugar esta solução a 3000 rpm e utilizar o sobrenadante como solução de ensaio. solução
solução solução Equilibre 2 mL da solução do substrato a 37 ℃ por 10 minutos, adicione 2mL de cloreto de ferro (III) (para o teste da atividade da transglutaminase) e agite bem imediatamente. Em seguida, adicione 0.2mL da solução da amostra, agite bem, e centrifuge esta solução. Use o sobrenadante como solução de controle. Procedimento
Medir a absorbância da solução de ensaio e da solução de controlo a um comprimento de onda de 525 nm. O valor da absorbância da solução de ensaio é superior ao da solução de controlo.